Gdje se testirati na HIV metodom PCR. PCR za HIV, čemu služi ovaj test?

Pravovremeno otkrivanje virusa humane imunodeficijencije (HIV) ključ je uspješne antiretrovirusne terapije. Pravilno liječenje omogućuje vam kvalitetan život više od 70 godina kontroliranjem virusnog opterećenja u tijelu.

Jedini način otkrivanja virusa je provođenje laboratorijskih pretraga uz uzimanje venske krvi od bolesnika. Pozivamo vas da saznate koliko će dugo nakon infekcije krvni test pokazati HIV i što učiniti ako dobijete pozitivan rezultat?

Ako postoji čak i mala vjerojatnost zaraze, oba se partnera moraju testirati na HIV. Razvoj infekcije je individualni karakter, a virusno opterećenje će biti različito između dva pacijenta.

Ako se vaš partner testira na HIV i dobije negativan rezultat, to ne znači da ste zdravi. I, naprotiv, davanje pozitivne dijagnoze vašem partneru ne znači da ste zaraženi.

Uzimanje uzoraka venske krvi omogućuje otkrivanje antitijela koje tijelo proizvodi kao odgovor na virus. Testiranje se preporučuje za oba partnera istovremeno. Upamtite, što prije saznate za infekciju, to su bolji rezultati terapije.

Faze i simptomi bolesti

Koliko je vremena potrebno da se pojave simptomi HIV-a? Prvi znakovi se uočavaju 14-21 dan nakon infekcije.

Naziv faze razvoja HIV-a	Karakteristični simptomi	Što trebate znati?
Inkubacija	-kašalj, -glavobolja, – povećan umor, - visoka tjelesna temperatura, – osip, – opća slabost.	Nakon 2-3 tjedna navedeni simptomi nestaju i stanje osobe se vraća u normalu.
Skriven	Karakterizira potpuni odsutnost simptoma. Osoba može dugo (5-10 godina) ne shvatiti da se virus umnožava u njegovom tijelu.	Nemoguće je odrediti infekciju simptomima. Jedini način da se otkrije je prolaskom posebnih medicinskih testova koji određuju količinu antitijela.
Sekundarna	- povećanje temperature, – povećani limfni čvorovi, – osip na koži i sluznicama, -povećana jetra – gastrointestinalni poremećaji, – aktivni razvoj zaraznih bolesti.	Simptomi se javljaju neko vrijeme, nakon čega ponovno nestaju i stanje bolesnika se poboljšava. Međutim, infekcija se nastavlja razvijati u tijelu.
Terminal	Karakterizira ga potpuno slabljenje imunološkog sustava – nije u stanju dati nikakav imunološki odgovor.	U terminalnoj fazi HIV-a razvija se AIDS.

Koliko vremena je potrebno da se pojavi AIDS? Simptomi bolesti

Nakon nezaštićenog spolnog odnosa ili od trenutka infekcije drugim putem, virus se umnožava u ljudskom tijelu, povećavajući virusno opterećenje. Nedostatak liječenja (antiretrovirusna terapija) dovodi do razvoja AIDS-a nakon 10-12 godina.

Pažnja! Uz pravilan HAART i pridržavanje svih preporuka liječnika, bit će moguće kontrolirati virusno opterećenje i usporiti prijelaz virusa u stadij AIDS-a.

Simptomi AIDS-a:

• česte zarazne bolesti,
• blijeda koža,
• gubitak kose i zubi,
• bol u zglobovima,
• krhkost koštanog tkiva (visoka vjerojatnost prijeloma).

Vrste testova na HIV

Krv za HIV možete dati u javnoj klinici, privatnom laboratoriju ili u posebnim centrima za AIDS. Vrsta analize određuje pripremu za uzimanje krvi, trajanje laboratorijskog testa i vjerojatnost dobivanja lažnog rezultata.

Imunobloting

Imunoblotiranje (Western blot) je vrlo osjetljiva metoda za prepoznavanje HIV-a, čija je suština odvajanje proteina virusa. Prebacuju se na nitroceluloznu membranu, a zatim se antigeni, koji se razlikuju po molekularnoj masi, uspoređuju s uzorcima na test traci.

Značajka imunoblotinga je mogućnost određivanja stadija infekcije, što omogućuje trenutni početak liječenja. Kada se testirati na HIV ovom metodom? Obično se propisuje kada se dobije pozitivan ili neodređen rezultat RPGA i ELISA.

Ekspresna analiza

Brzi test krvi, urina i sline može brzo otkriti prisutnost virusa. Rezultat istraživanja bioloških tekućina postaje poznat u roku od 1-1,5 sati od trenutka isporuke. Nedostatak ove metode je velika vjerojatnost nepouzdanog rezultata ako se infekcija dogodila nedavno.

PCR dijagnostika

PCR dijagnostika otkriva virus na razini DNK i najprecizniji je način utvrđivanja infekcije. Vjerojatnost dobivanja nepouzdanog rezultata je samo 1%.

Dijagnostički rezultat PCR poznat je 3 dana nakon vađenja krvi. Posebnost tehnike je u tome što se temelji na identificiranju stanica samog virusa, a ne traženju proizvedenih antitijela.

Vezani imunosorbentni test

Vezani imunosorbentni test(ELISA) temelji se na otkrivanju antitijela na HIV. Prikuplja se venska krv (strogo na prazan želudac!) koja se provjerava na prisutnost antitijela koja proizvodi tijelo.

ELISA je najčešća metoda za dijagnosticiranje HIV-a.

Koliko vremena je potrebno da testovi na HIV budu spremni?

Rezultati većine testova na HIV postaju poznati unutar 3-10 dana od trenutka kada su uzeti. Razdoblje je određeno razinom materijalno-tehničke opremljenosti laboratorija i stupnjem njegove opterećenosti.

Prije uzimanja analize:

• NE jesti hranu 8 sati prije termina, donirati krv na prazan želudac;
• NE piti alkohol;
• NE piti gaziranu vodu, sokove i druga pića, osim čista voda i nezaslađeni čaj;
• NE uzimati antibiotike i druge lijekove.

U kojim slučajevima je potrebno napraviti test na HIV?

Redovito testiranje radi otkrivanja infekcije preporučuje se homoseksualcima, medicinskim radnicima i djeci ako su rođena od HIV pozitivne majke.

Testiranje na virus humane imunodeficijencije potrebno je:

• nakon nezaštićenog seksualnog kontakta s neprovjerenim partnerom,
• nakon silovanja
• s povećanim limfnim čvorovima i naglim gubitkom težine,
• s čestim virusnim bolestima,
• nakon transfuzije krvi, transplantacije mekih tkiva ili unutarnjih organa,
• kada je partneru dijagnosticiran HIV.

Što učiniti ako se HIV ipak otkrije?

U slučaju otkrivanja HIV-a odmah se obratite stručnjaku iz Centra za prevenciju i kontrolu AIDS-a. On će izdati uputnicu za liječnički pregled kako bi identificirao popratne bolesti i moguće komplikacije.

Na temelju rezultata testova i pregleda sastavlja se režim antiretrovirusne terapije. Sastoji se od dnevnog unosa (2-3 puta dnevno) lijekova koji suzbijaju replikaciju virusa.

Ako postoji rizik od zaraze HIV-om, kada se možete testirati?

Prvi znakovi infekcije u 70-75% bolesnika uočavaju se 14 dana nakon infekcije ( grlobolja, groznica, umor). Nažalost, većina zaraženih ljudi ih pripisuje prehladi.

Test krvi za korištenje PCR metode uzima se nakon 2 tjedna od trenutka sumnje na infekciju. Kod standardnog ELISA testiranja virus se može otkriti tek nakon 3-5 mjeseci.

Tijekom tog razdoblja virus se razvija i umnožava u tijelu, što dovodi do povećanja virusnog opterećenja i omogućuje otkrivanje infekcije. Važno je da svaka osoba ima individualno razdoblje inkubacije.

Ako je nalaz negativan, onda više nema razloga za brigu?

Ako rezultati testa daju negativnu dijagnozu, ali je prošlo više od šest mjeseci od sumnje na infekciju, vjerojatnost infekcije ostaje. Preporuča se ponovno darivanje venske krvi još 3 mjeseca nakon inicijalne pretrage.

Razlozi za lažno negativan rezultat mogu biti niska stopa reprodukcije virusa (povećano virusno opterećenje), određene bolesti ili nepridržavanje preporuka prije davanja krvi.

Ne morate se brinuti ako se nakon ponovnog testiranja na HIV potvrdi negativan rezultat.

Što trebam učiniti ako je rezultat testa negativan, ali i dalje imam simptome?

Nažalost, identificiranje HIV-a prema simptomima nije dopušteno. Dijagnoza se postavlja samo na temelju rezultata laboratorijskih testova (imunoblotting, ELISA, itd.). Ako je negativna dijagnoza potvrđena sekundarnom analizom, tada su simptomi koji se pojavljuju posljedica drugih bolesti.

Koliko je pouzdan pozitivan rezultat testa?

Vjerojatnost da je pozitivan rezultat testa lažan smanjena je na 1% za analizu kod dijagnosticiranja metodom PCR. Kod drugih studija rizik od dobivanja lažno pozitivnog rezultata je puno veći, pa se kod potvrde dijagnoze provode ponovne pretrage!

Razlozi za lažno pozitivan rezultat:

• dijabetes,
• trudnoća,
• onkološke bolesti,
• STD,
• hepatitis.

Što je neodređen rezultat?

Neodređen rezultat znači prisutnost najmanje jednog skupa proteina virusa u imunoblotu. Obično se postavlja ako se infekcija dogodila nedavno i pacijent ima nisko virusno opterećenje.

Ako je rezultat neodređen, test se ponavlja nakon 3 i 6 mjeseci. Tijekom cijelog tog razdoblja pacijent je pod nadzorom liječnika.

Dekodiranje rezultata

Učinkovitost testnih sustava razlikuje se (ovisno o odabranoj analizi), ali kada se otkriju 3 glavna skupa proteina, postavlja se pozitivna dijagnoza.

Rezultati davanja venske krvi:

Dakle, HIV se može utvrditi u tijelu samo testovima. Nemojte se ustručavati dati vensku krv ako postoji mogućnost infekcije!

Zašto su HIV i AIDS tako strašni, koje dijagnostičke metode postoje. Detaljne informacije o PCR studijama.

Prema statistikama Svjetske zdravstvene organizacije zajedno s UN-ovom organizacijom UNAIDS, u proteklih četrdeset godina od HIV-a i AIDS-a umrlo je više od 25 milijuna pacijenata. Nisu uzalud epidemiolozi HIV prozvali kugom 20. stoljeća, jer su štete koje ova infekcija čovječanstvu nanosi ogromne. Najviše su zaražene zemlje afričkog kontinenta. Zaraza teško pogađa gospodarstva ionako nestabilnih država, a ljudi su oskudni.

Kada se pojave simptomi, brza dijagnoza je izuzetno važna. infekcija tijela HIV infekcijom, jer pravovremeni tijek terapije može spasiti ili barem produžiti život pacijenta. Danas je tehnološki napredak daleko odmakao: najnoviji načini dijagnoza virusa HIV-a i AIDS-a, liječenje je dostupno svakoj osobi na planeti, pouzdanost testova karakterizira mali stupanj pogreške, a terapiju karakterizira visok postotak učinkovitosti.

Dijagnoza HIV infekcije

U našoj zemlji utvrđivanje prisutnosti HIV infekcije u tijelu pacijenta je kompleks analiza:

• Vezani imunosorbentni test
• Imunološki bloting
• Lančana reakcija polimerazom
• Ekspresni testovi

Enzimski imunološki test.

Probir (ELISA test) je početna faza određivanja infekcije u tijelu. Temelji se na proteinskim spojevima virusa nastalim u umjetnim uvjetima, koji identificiraju antitijela koja proizvode imunološke stanice kao reakciju na infekciju. Događa se kemijska reakcija između reagensa, zbog čega indikatorski element mijenja boju. To znači da je rezultat testa pozitivan. Informacije ovom metodom mogu se dobiti unutar nekoliko tjedana od trenutka infekcije. Ovom metodom se ne otkriva prisutnost infekcije u bolesnika, ali se utvrđuju proizvedena protutijela na ovu infekciju. Dešava se da proizvodnja antitijela počinje 10-15 dana nakon infekcije, ali u velikoj većini slučajeva kasnije - nakon 1-1,5 mjeseci.

Podaci o takvoj analizi obrađuju se od dva do deset dana.

Pouzdanost diangoze za HIV potkrijepljena je IB analizom. Isključivo pozitivan test IB za virus može poslužiti kao valjan razlog za tvrdnju o infekciji.

Suština analize:

Uzima se uzorak venske krvi za analizu u laboratoriju. Uzorak se dodatno priprema, proteinski spojevi koji se nalaze u njemu se elektrificiraju u komori za ispitivanje, a zatim se raspoređuju u supstancu gela prema njihovoj molekularnoj težini. U pripremljeni uzorak stavlja se nekoliko puta papirnata traka premazana reagensom. Ako u uzorku ima protutijela na virus, dolazi do kemijske reakcije i na test traci postaju vidljive linije. Kada se pojave 2 ili 3 crtice p24, gp41 i gp120 ili gp160, rezultat testa je pozitivan.

Ako se dobije pozitivan rezultat IB analize, s pogreškom od jedan posto, može se zaključiti o prisutnosti HIV infekcije u organizmu.

Brzi testovi na HIV i AIDS

Najnovije tehnologije za određivanje virusa imunodeficijencije u tijelu su ekspresne metode. Informacije o takvoj analizi mogu se dobiti u roku od nekoliko minuta nakon završetka. Najveću pouzdanost imaju imunokromografski testovi - posebne test trake na čiju je površinu raspršen sloj reagensa. Protutijela sadržana u ispitivanom materijalu dolaze u kontakt s reagensom, mijenjajući boju indikatora. Nakon nekoliko minuta pojavljuju se dvije pruge koje ukazuju na prisutnost infekcije. Prisutnost jedne linije znači da nema infekcije.

Takav test se može koristiti kao dodatni; informacija o takvom testu nužno je potvrđena drugim studijama.

Koliko košta brzi test na HIV?

Ekspresni test za HIV koštat će u prosjeku 200-1000 rubalja.

HIV PCR jedna je od najpouzdanijih metoda za postavljanje ove po zdravlje i život opasne dijagnoze. Liječnik može preporučiti testiranje svakoj osobi koja ima razloga sumnjati na infekciju virusom humane imunodeficijencije. Pacijenti se često pitaju što je bit tehnike te koje su njezine prednosti i nedostaci.

Kada i u kojem roku trebate posjetiti bolnicu radi predaje biomaterijala na istraživanje?

PCR je dijagnostički pristup koji se u kliničkoj medicini pojavio zahvaljujući molekularnoj biologiji. Upravo iz ove grane znanosti istraživanja su došla u medicinu. I počeo se aktivno koristiti za postavljanje različitih dijagnoza, uključujući HIV infekciju.

Svi znaju da se svaki živi organizam sastoji od DNK i RNK. Lančana reakcija polimeraze temelji se na sposobnosti ovih nukleinskih kiselina da se samorepliciraju.

Važno je zapamtiti da je PCR sposoban otkriti čak i male koncentracije virusnih čestica u krvi. To se događa zbog činjenice da u biološkoj tekućini cirkuliraju "fragmenti" nukleinskih kiselina, koji se hvataju i prepoznaju posebnom opremom. To vam omogućuje da postavite ispravnu dijagnozu čak i ako se infekcija dogodila vrlo nedavno.

A virusne čestice još nisu imale vremena umnožiti se u tijelu pacijenta. Biološki materijal dobiven od pacijenta stavlja se u poseban reaktor. Najčešće se koristi venska krv.

Posebne komponente, u interakciji s virusnim česticama, uvelike povećavaju broj otkrivenih fragmenata. Kao rezultat toga, fragmenti postaju prepoznatljivi, mogu se procijeniti i izvući zaključci o infekciji.

Darujte krv iz vene prema standardnoj metodi.

Nemojte jesti prije posjeta liječniku; bolje je doći ujutro. Ako pacijent prolazi kroz imunostimulaciju, mora se prekinuti dva tjedna prije testa.

Prednosti i mane tehnike

Kao i svaka druga metoda za dijagnosticiranje određene bolesti, PCR testiranje ima niz prednosti i nedostataka. Prednosti metode uključuju:

• mala vjerojatnost nailaska na lažno negativan ili lažno pozitivan rezultat;
• mogućnost korištenja ne samo krvi za istraživanje, već i drugih bioloških tekućina, kao što su vaginalni iscjedak, sjeme itd. (međutim, kako liječnici primjećuju, točnost se može smanjiti);
• mogućnost korištenja jednom uzetog materijala za dijagnosticiranje nekoliko bolesti odjednom;
• brzina dobivanja rezultata (ako je analiza hitna, rezultati se dobivaju već sljedeći dan);
• sposobnost brzog dijagnosticiranja infekcije i, sukladno tome, početka liječenja bolesti, čime se poboljšava prognoza;
• nema dobnih ograničenja (vađenje krvi iz vene može se provesti čak i kod novorođenčeta).

Naravno, PCR ima i nedostatke. To uključuje:

• prilično visoka cijena studije, osobito u usporedbi s osnovnim metodama probira koje se koriste u većini bolnica;
• potreba za sofisticiranom opremom, koja je također skupa;
• još uvijek postoji mogućnost nailaska na lažne rezultate ako je tehnologija analize, proces uzimanja krvi pokvaren ili ako osoba boluje od autoimune, tumorske ili kronične zarazne bolesti.

Naravno, PCR testiranje treba obaviti po preporuci liječnika.

Liječnik će u svakom konkretnom slučaju moći procijeniti koliko će rezultati biti pouzdani. Ako liječnik smatra da je to potrebno, savjetovat će svom pacijentu drugu dijagnostičku metodu umjesto PCR-a. Ili će nakon primitka rezultata nadopuniti dijagnostički akcijski plan dodatnom stavkom.

Mnogi pacijenti su zabrinuti oko pitanja podvrgavaju li se svi ljudi PCR testiranju na HIV. Zapravo, dijagnoza nije potrebna svima. Međutim, postoje skupine pacijenata koji povremeno moraju dati krv na analizu.

• Preliminarna dijagnoza

• Pozitivan test imunoglobulina

Imunobloting koji daje pozitivan rezultat na virus humane imunodeficijencije nužno se potvrđuje lančanom reakcijom polimerazom. Učinite isto ako je prvo proveden PCR. Međusobno nadopunjavanje studija gotovo u potpunosti eliminira mogućnost pogrešaka.

• Kontrola terapije

Pacijenti s potvrđenim HIV statusom dosta redovito daju krv za PCR testiranje. To je potrebno kako bi se pratio napredak liječenja i, ako je potrebno, prilagodila terapija.

• Procjena sigurnosti krvi

Svaka donirana krv mora biti testirana lančanom reakcijom polimerazom.

Time se eliminira prijenos HIV infekcije putem transfuzije krvi.

• Procjena statusa novorođenčeta

Ako je dijete rođeno od HIV pozitivne žene, on također mora biti podvrgnut PCR-u. To je neophodno kako bi se utvrdio status djeteta i razvila taktika za njegovo daljnje upravljanje.

Pouzdanost studije

Mnogi pacijenti su zabrinuti oko pitanja koliko je pouzdana lančana reakcija polimeraze ako planiraju dijagnosticirati virus ljudske imunodeficijencije. Unatoč činjenici da je PCR jedna od najmodernijih metoda, još uvijek joj ne možete vjerovati 100%.

Danas se PCR još uvijek ne koristi kao metoda probira upravo zato što može dati lažno pozitivne rezultate.

Kako bi se to izbjeglo, liječnici preporučuju pravilnu pripremu za prikupljanje biomaterijala, ali ni priprema ne pomaže uvijek. Na primjer, test može dati pozitivan rezultat ako osoba ima maligni tumor u tijelu. Ako boluje od bilo kakve kronične infekcije ili, na primjer, autoimunog procesa. Čak i unatoč mogućnosti dobivanja lažno pozitivnog rezultata, PCR se u praksi koristi kao jedna od najpouzdanijih metoda.

Kako bi uklonili pogreške, liječnici često preporučuju svojim pacijentima da ponove test ako je rezultat pozitivan. Također, u nekim slučajevima, preporuča se dodatno provesti ELISA reakciju i druge studije. Provođenje skupa testova uvijek daje pouzdaniji rezultat nego provođenje samo jedne studije.

Za što se test može koristiti?

Ne znaju svi pacijenti za što se točno lančana reakcija polimeraze koristi u liječničkoj kliničkoj praksi.

• Potrebno je otkriti bolest u latentnom razdoblju

Virus imunodeficijencije može postojati latentno u tijelu dugo vremena.

PCR je jedini test koji može ukazati na prisutnost patogena u tijelu. Čak i ako još uvijek ima vrlo malo virusnih čestica.

• Utvrđivanje genotipa

Danas je identificirano nekoliko genotipova HIV infekcije. Često je važno utvrditi koji je specifični genotip zarazio osobu, jer o tome ovisi izbor antivirusnih lijekova.

• Određivanje virusa, a ne antitijela na njega

Jedna od prednosti analize je ta što tehnika ne može detektirati antitijela na virusne čestice, već sam virus.

Mnoge pacijente zanima zašto je to prednost. Radi se o tome da ako je naglasak na otkrivanju samog patogena, smanjuje se vjerojatnost nailaska na lažno pozitivne reakcije zbog sličnosti različitih antitijela. Kako liječnici primjećuju, u mnogočemu je sposobnost otkrivanja samog virusa, a ne antitijela, učinila tehniku ​​tako učinkovitom.

Kada je rok?

Pacijenti su često zainteresirani za pitanje koliko dugo treba posjetiti liječnika za doniranje biološkog materijala.

Sve ovisi o tome što točno planirate odrediti pomoću tehnike.

Preporuča se tražiti DNA virusa humane imunodeficijencije ako postoji sumnja na infekciju i potrebna je rana dijagnoza. U prosjeku se DNK u krvi počinje detektirati deset dana nakon što se infekcija dogodi. Međutim, preporuča se potvrditi analizu ELISA testom, prvo nakon 4 tjedna od infekcije, a zatim nakon 12 tjedana.

Ako ELISA potvrdi dijagnozu, status bolesnika se smatra pozitivnim.

Istraživanja za određivanje RNA uvijek su kvantitativna. Preporuča se to učiniti ako pozitivno stanje Pacijentica je potvrđena i započeto je liječenje antivirusnom terapijom. Ako u tijelu ima puno RNK, tada se dijagnosticira akutna faza bolesti. Ako to nije dovoljno, smatra se da je suzbijanje uzročnika bilo uspješno, te se terapija može promijeniti na blažu.

• Procjena otpora

Neki sojevi HIV-a otporni su na lijekove koji se koriste za njihovo liječenje. Također se preporučuje ispitivanje za procjenu vjerojatnosti izostanka odgovora na liječenje. Provodi se ako nakon propisane terapije nema poboljšanja. Također se preporučuje tijekom akutnog razdoblja zaraznog procesa.

Virus humane imunodeficijencije se svake godine sve aktivnije širi u ljudskoj populaciji. Svaka osoba može se susresti s patologijom, pa je ponekad važno znati kako postaviti ispravnu dijagnozu.

PCR je dobra dijagnostička metoda ako je liječnik pravilno koristi. A glavna stvar za pacijenta je slijediti preporuke liječnika za pripremu za studiju, koje nisu komplicirane.

Dijagnostičku tehniku ​​PCR izvorno je prije 35 godina razvio američki znanstvenik Kari Mullis. Izumitelj studije dobio je međunarodnu Nobelovu nagradu 1993. za svoju inovaciju. Postao je neophodan za svaku laboratorijsku aktivnost.

PCR se koristi u molekularnoj biologiji za stvaranje mnogo kopija (pojačavanje) malih dijelova DNK. DNA polimeraza može samo dodati nukleotid već postojećoj 3-OH skupini. Dakle, treba mu početnica kojoj može dodati prvi nukleotid. Ovaj zahtjev vam omogućuje da identificirate određeni dio niza uzoraka koji treba dijagnosticirati. Na kraju PCR reakcije, određena sekvenca će se nakupiti u milijarde kopija (amplikona).

PCR uključuje proces zagrijavanja i hlađenja koji se naziva toplinski ciklus, a provodi ga specijalizirana oprema. Lančana reakcija polimerazom (PCR) je relativno jednostavna tehnika. Poboljšava predložak DNA za proizvodnju specifičnih fragmenata DNA in vitro (in vitro analiza). Tradicionalne metode kloniranja sekvence DNK u vektor i njegove replikacije u živoj stanici često zahtijevaju nekoliko dana do nekoliko tjedana istraživanja. Ali možete dobiti rezultate amplifikacije sekvence DNK pomoću PCR-a nakon nekoliko sati.

Većina biokemijskih testova koji se koriste u dijagnostici zaraznih bolesti zahtijevaju dovoljno velika količina biološki materijal. Za PCR ovaj uvjet nije obavezan. Stoga PCR može pružiti osjetljiviju detekciju patogena. I više visoke razine pojačanje određenih sekvenci u kraćem vremenu s prilično ograničenom količinom biomaterijala. Ove značajke čine tehnologiju iznimno korisnom. Ne samo u temeljna istraživanja, ali i za osobne potrebe. Uključujući testiranje genetskog identiteta, forenzičko testiranje, industrijsku kontrolu kvalitete.

Glavna vrijednost analize leži u sposobnosti identificiranja spolno prenosivih patologija prije nego što se razviju prvi znakovi. PCR analiza se koristi kada je potrebna rana dijagnoza HIV infekcije. Kao i određivanje RNK virusa u krvi davatelja. Zbog visoke osjetljivosti analize, odgovor se može dobiti 7-14 dana nakon sumnje na infekciju. Dijagnostička pouzdanost doseći će od 85 do 98%. Međutim, PCR test nije propisan za sve. Zato što je to prilično skup studij. Što je najvažnije, zahtijeva skupu opremu i određene stručne vještine laboratorijskog osoblja. Ako pacijent prethodno nije bio u situacijama povezanim s povećanim rizikom od infekcije, reakcija polimeraze nije preporučljiva.

Kvalitativna reakcija polimeraze na HIV

Provođenje visokokvalitetne PCR za HIV omogućuje određivanje prisutnosti virusne bolesti u tijelu. Pacijent može dobiti rezultat u obliku sljedećih ocjena: pozitivan, lažno pozitivan, negativan. Ali studija ne omogućuje određivanje broja kopija retrovirusa. Kvalitativna analiza se ne provodi kod pacijenata kod kojih je prethodno dijagnosticirana infekcija. Nije propisano pratiti učinkovitost antivirusne terapije.

Kvantitativni PCR za HIV

Provodi se radi određivanja kopija RNA virusa u biološkom materijalu pacijenta. Kvantitativni PCR propisuje se samo pacijentima s prethodno identificiranom infekcijom, kao praćenje tijeka liječenja.

PCR u stvarnom vremenu

Koristi se u laboratorijskoj dijagnostici za stvaranje kopija DNK sekcija. Također za simultano kvantitativno istraživanje i detekcija sekvence DNA u biomaterijalu. U biti, dijagnoza je kvantitativni PCR.

Napomena!

U raznim laboratorijima možete pronaći nekoliko dijagnostičkih formulacija: “PCR kvantitativno određivanje” i “PCR u stvarnom vremenu”.

Obje analize su identične.

Uzimanje materijala za HIV dijagnostiku

Prikupljanje biološkog materijala za dijagnostiku HIV-a pomoću PCR-a provodi se prema određenim standardima. Manipulacija se provodi u sobi za liječenje. Koriste se jednokratni sterilni instrumenti. Paket s instrumentima otvara se neposredno u blizini pacijenta. Prikupljeni materijal se stavlja u sterilne epruvete prethodno tretirane CrO3 (smjesa kroma). Biološki materijal je venska krv koja se daje ujutro i natašte. Nekoliko dana prije testa treba izbjegavati alkohol, masnu i začinjenu hranu i prestati uzimati lijekove.

Ako otkažete lijekovi nije moguće i treba ga prijaviti prije analize.

Osim toga, može se uzeti bris iz uretre i vagine kako bi se identificirale popratne spolno prenosive bolesti. Studija se provodi anonimno, a rezultate pacijent dobiva osobno. Preporučljivo je sa sobom imati osobnu iskaznicu.

Nakon koliko vremena možete napraviti PCR test na HIV?

Moguće je otkriti prisutnost HIV virusa nakon 4-6 dana nakon infekcije. U u ovom slučaju Informativni sadržaj analize dosegnut će 85%. Nakon 10-13 dana analiza može odrediti bolest s točnošću od 98%. Negativan rezultat bit će istinit samo ako se ne uzima prije 2 tjedna nakon sumnje na infekciju.

Razlozi za lažno pozitivan rezultat

Dobivanje lažno pozitivnog rezultata prilično je teško.

To je moguće ako se ne poštuju pravila za prikupljanje biološkog materijala, epruvete su neispravno označene, korištenje nekvalitetnog testnog sustava i drugi slični čimbenici. U drugim slučajevima, vjerojatnost dobivanja sličnog rezultata nije veća od 2%.

Koliko je vremena potrebno da se dobiju rezultati testa?

S tehničkog stajališta, rezultati PCR-a mogu se dobiti unutar 4 sata. Međutim, u praksi pacijent dobiva laboratorijski nalaz od jednog do nekoliko dana. Općenito, vrijeme ovisi o radnom opterećenju laboratorija i organiziranosti njegovog rada.

Provođenje reakcije polimeraze u novorođenčadi

PCR se propisuje kada je dijete rođeno od HIV pozitivne majke. Provođenje ELISA u ovom slučaju nije informativno. Budući da dijete zadržava antitijela protiv retrovirusa do otprilike 2. godine života. Iz tog razloga imunoenzimski test neće dati točan odgovor. Učini li se PCR test djetetu od 4-6 tjedana i dobije se pozitivan rezultat, govorit ćemo o infekciji.

Ako PCR proveden između 8 tjedana i šest mjeseci starosti pokaže negativne rezultate (pod uvjetom da dijete nije hranjeno majčino mlijeko majka) infekcija je isključena.

Zašto je PCR bolji od ELISA testa za otkrivanje HIV-a?

Reakcija polimeraze omogućuje otkrivanje RNK virusa i njegove prisutnosti u tijelu, uključujući i kvantitativne. Zadatak ELISA je određivanje antitijela na HIV infekciju. Imunoenzimski test nije inferioran u odnosu na PCR u određivanju moguće infekcije, njegova točnost doseže 99%. Međutim, za razliku od PCR-a, ne može odrediti bolest pomoću rani stadiji njegov razvoj.

Prednosti HIV PCR-a

• Reakcija polimeraze izravno određuje prisutnost infektivnog agensa. Na primjer, ELISA može otkriti isključivo antitijela i otpadne produkte mikroorganizma.
• Analiza jasno identificira specifični patogen, čak i ako postoji nekoliko onih koji međusobno reagiraju.
• Tehnika vam omogućuje ispitivanje bilo koje vrste biološkog materijala, uključujući osušene kapi krvi.

Jedan od nedostataka PCR-a je povećana osjetljivost analize. To ponekad uzrokuje lažno pozitivan rezultat. To se događa ako je čak i mala količina strane DNK prisutna u epruveti ili na instrumentima.

Dijagnoza HIV-a pomoću PCR i ELISA: tumačenje, pouzdanost rezultata

Enzimski imunološki test, u kojem rezultati testa pokazuju odsutnost antitijela na HIV i antigen p24 u tijelu, negativan je. Ako su te molekule prisutne, daje se pozitivan dijagnostički zaključak. U nekim slučajevima pacijent može dobiti lažno pozitivan ili lažno negativan rezultat. Ovo je posljedica rani datum trudnoća, prisutnost herpetičke infekcije, netočno uzorkovanje materijala, kršenje prijevoza epruveta. Osim toga, slični rezultati nalaze se i kod pacijenata s tekućim autoimunim bolestima i raznim vrstama hepatitisa. Može se provesti Western Blot (imuni blot), koji kombinira ELISA test i odvajanje virusnih proteina.

Tada će pozitivan rezultat biti u prisutnosti glikoproteina gp160 virusne infekcije. On je prekursor glikoproteina ovojnice HIV-a gp41 i gp120. Ako te molekule nedostaju, zaključak laboratorijskog ispitivanja smatra se negativnim. Provođenje Western Blot-a u kombinaciji s ELISA-om omogućuje dobivanje rezultata čija pouzdanost prelazi 98%. U slučaju kada je ELISA pozitivan, a Western Blot negativan, testiranje se smatra sumnjivim i zahtijeva PCR.

Opis

Metoda određivanja Kvantitativno određivanje, PCR s detekcijom u stvarnom vremenu.

Materijal koji se proučava Krvna plazma (EDTA)

Moguć kućni posjet

Određivanje RNK HIV-a tipa 1 u krvnoj plazmi PCR-om s detekcijom u realnom vremenu. Studija se provodi pomoću opreme tvrtke Hoffmann-La Roche (Švicarska) primjenom standardizirane tehnologije s automatiziranom pripremom uzoraka.

Studija koncentracije HIV tipa 1 RNA u krvi, koja se koristi za predviđanje i praćenje učinkovitosti terapije.

Virus humane imunodeficijencije (HIV) etiološki je uzročnik sindroma stečene imunodeficijencije (AIDS). HIV infekcija može se prenijeti spolnim putem, putem kontaminirane krvi i krvnih produkata ili sa zaražene majke na njezin fetus. Između 3 i 6 tjedana nakon infekcije obično se razvije kratkotrajni akutni sindrom, karakteriziran simptomima sličnim gripi i visokom razinom viremije u perifernoj krvi. U većini slučajeva tada se razvija imuni odgovor specifičan za HIV i smanjenje viremije u plazmi, obično unutar 4 do 6 tjedana nakon pojave simptoma. Nakon serokonverzije (pojave specifičnih protutijela) započinje klinički stabilna asimptomatska faza koja može trajati godinama. Asimptomatsko razdoblje karakterizira niska razina perzistentne viremije u plazmi i postupno smanjenje razine CD4+ T-limfocita, što kasnije dovodi do razvoja teške imunodeficijencije, višestruke oportunističke infekcije, onkogeneza i smrt. U osoba s utvrđenom HIV-1 infekcijom kvantitativno mjerenje razine HIV-1 RNA u krvi koristi se u svrhu prognoze i praćenja antiretrovirusne terapije.

Analitički pokazatelji:

Klinička specifičnost testa: 100%, s intervalom pouzdanosti 99,6-100%.

Osjetljivost testa: od 20 kopija/ml.

Raspon linearnog testa: 20 – 1 * 10 7 kopija/ml

Analizirani su podtipovi skupine M i O (HIV-1).

Indikacije za upotrebu

Test je namijenjen za korištenje u liječenju pacijenata zaraženih HIV-om 1, u kombinaciji s kliničkim podacima i drugim laboratorijskim markerima progresije bolesti. Test se koristi za prognozu (na temelju osnovnih razina HIV-1 RNA) ili za praćenje učinkovitosti antiretrovirusne terapije (na temelju promjena u plazmatskim razinama HIV-1 RNA tijekom antiretrovirusne terapije).

Oprez: Test nije namijenjen probiru na HIV-1 u krvi i krvnim produktima niti za potvrdu dijagnoze HIV-1 infekcije.

Interpretacija rezultata

Tumačenje rezultata istraživanja sadrži informacije za liječnika i nije dijagnoza. Podaci u ovom odjeljku ne smiju se koristiti za samodijagnozu ili samoliječenje. Liječnik na temelju rezultata postavlja točnu dijagnozu ovu anketu, kao i potrebne informacije iz drugih izvora: povijest bolesti, rezultati drugih pretraga i sl.

Mjerne jedinice: količina otkrivene RNK virusa humane imunodeficijencije tipa 1, izražena u C/ml (kopija/ml). Jedna kopija HIV-1 RNA odgovara 1,67 međunarodnih jedinica (IU) prema prvom međunarodnom standardu Svjetske zdravstvene organizacije za HIV-1 RNA u testovima detekcije nukleinske kiseline (NIBSC 97/656).

Tumačenje rezultata:

• "nije otkriveno": HIV-1 RNA nije otkriven ili　vrijednost ispod granice osjetljivosti metode (20 kopija/ml). Rezultat se tumači kao "HIV-1 RNA nije otkrivena";
• < 20 C/ml (копий/мл): HIV-1 РНК выявлена в концентрации на пределе чувствительности метода, количественная характеристика в копиях/мл с удовлетворительной точностью невозможна;
• od 20 do 10000000 C/ml (kopija/ml): Dobivena vrijednost je unutar linearnog raspona, rezultat je pouzdan;
• >10000000 C/ml (kopija/ml): Rezultat se tumači kao: „HIV-1 RNA otkrivena je u naznačenoj koncentraciji, izvan gornje granice linearnog raspona; Test je proveden u razrjeđenju 1:X.”

Imajte na umu da se vrijeme obrade za PCR testove može produljiti kada se provode potvrdni testovi.